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如何应对植物组培过程中的污染问题？新型高效方法值得推荐

植物组织培养是20世纪初发展起来的一门新兴技术，随着这项技术的日益完善，其应用也越来越广泛。但是在组织培养过程中，常常会遇到污染问题使实验无法进行下去，甚至导致整个实验失败，给科研和工厂化生产带来损失。

污染是指在植物组织培养过程中，培养基和培养材料滋生杂菌，最终导致培养失败的现象。常见的污染类型包括：由霉菌引起的真菌性污染、多由外植体带菌引起的细菌性污染、长期多次继代引起的内生菌污染以及农杆菌污染等。面对植物组培污染问题，我们通常采取在培养基中加入适量的抗生素（如青霉素、链霉素、氯霉素等）来抑菌。但是抗生素一般不稳定，遇酸、碱或加热都易分解而失去活性。而且单一抗生素抑菌容易产生抗药性，一旦停止使用，污染率就会显著上升。同时，高浓度的抗生素会影响植物的生长。

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为解决上述问题，我们推荐专业植物组培高效广谱性抗菌剂PPM™，它可以有效预防和清除由于空气、灭菌不彻底、交叉污染、外植体消毒等各种原因导致的植物组培苗的真菌、细菌、内生菌和农杆菌污染。可以加入培养基高温灭菌；而且在合理使用剂量下，不会对植物的生长产生任何影响。

使用方法如下：
1、常规污染预防用量：
一般推荐使用浓度为0.05%-0.2%（1L培养基中加入0.5-0.75ml PPM™）；愈伤增殖，器官形成，胚性组织发育等使用浓度为0.05%-0.075%。
2、植物内生菌污染处理：
种子：PPM™不推荐用于直接处理含有大量的细菌或真菌孢子的种子灭菌；对于种子离体萌发，建议先采用传统方法消毒，然后置于含 2-3%PPM™的全培养基础盐溶液中，轻轻搅拌4-12小时，此过程千万不能添加Tween20和调节pH，处理完成以后直接插入含有 PPM™(草本植物0.05-0.1%，木本植物0.2%)的培养基里进行培养。
外植体：：以 1cm 外植体为例，将外植体置于含 4-5%PPM™的全培养基础盐溶液中，轻轻搅拌4-12小时，此过程千万不能添加 Tween20和调节pH，处理完成以后直接插入含有PPM™(草本植物 0.05-0.1%，木本植物0.2%)的培养基里进行培养。
块茎，球茎和鳞状物的观赏植物样本：将其整体放入消毒剂中搅拌消毒处理以后，用水冲洗干净，将材料切成薄片，置于含 4-5%PPM™的全培养基础盐培养液中，轻轻搅拌4-12小时，此过程千万不能添加Tween20 和调节pH，处理完成以后无需冲洗直接插入含有 0.1-0.2%的PPM™的培养基里进行培养。
3、如果厚的外植体、污染严重的植株、种子等样本经过以上处理仍得不到理想效果，可尝试以下操作：
将材料浸泡在水中持续搅拌处理(松软组织搅拌1小时，硬实组织搅拌2小时)
将材料在含50%的PPM™全培养基础盐溶液中搅拌处理5-10分钟，此过程千万不能添加 Tween20 和调节pH
无需冲洗，将处理过的材料直接加入到培养基中即可。对于真菌污染，可在培养基中加入适当浓度的PPM™。对于真菌细菌混合性污染，建议在培养的第一个月的培养基中加入0.05%-0.2%的PPM™
4、严重污染材料污染去除与抢救（重污染不超过一周）
将污染的材料至于流水中用软刷刷洗，然后置于含50% PPM™的无菌水溶液中搅拌5-15分钟；对于细菌或者混合性污染，建议使用 100% PPM™与 0.6g/L 的柠檬酸无菌水溶液按 1：1 混合的低 pH(2.8-3.2)的酸性溶液处理
处理后的材料无需清洗，直接插入含0.05%-0.25的PPM™的培养基中培养至少一个月以上，其中前10天需要弱光培养
5、农杆菌的去除
共培养以后，将样本用无菌水清洗，然后将样本浸没在 100% PPM™（补充4X的培养基盐溶液）中处理2分钟，取出后用无菌纸吸干后并置于常用抗性培养基中培养，3 周后，更换到只含有0.05%-0.075% PPM™(无常用抗生素)的培养基中培养。

注意事项：
在所有 PPM™消毒处理外植体的过程中，尽量保证容器的体积足够大，并使外植体材料所有面积与含PPM的处理溶液充分接触，以保证消毒效果；
如果外植体出现高度氧化现象，不要扔弃，大约50%的外植体在 4-6 周内即可恢复
50% PPM™ 的处理溶液可以重复使用但是不推荐，因为使用次数和效果受外植体的体积与接种密度的影响。将50% PPM™的处理溶液保存在4ºC可适当延长其活性，一般可使用不超过10次。如果必要，建议配制2份50% PPM™溶液，一份用于外植体消毒内生菌污染，另一份用于消除“培养过程中”的轻度污染材料抢救，第二份溶液在每次处理过后需要用 0.2mm滤器过滤
如果50%PPM™溶液处理效果不理想，可采用100%PPM™溶液进行处理，处理方法相同，但使用次数不得超过10次。

产品信息：

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产品已发表文献：

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Greer SP, Rinehart TA. Dormancy and Germination In Vitro Response of Hydrangea macrophylla and Hydrangea paniculata Seed to Light, Cold-Treatment and Gibberellic Acid. J. Environ. Hort. 2010;28(1):41–47.
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