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高效实现细胞表面与胞内蛋白共染的流式细胞处理方法

在科研和临床诊断中，因流式细胞术可以对细胞内的生物标志物进行免疫染色和鉴定，其在鉴定细胞表型和功能中的应用已越来越重要。在细胞表型鉴定工作中，由于一些典型的膜分子定位在细胞质内，如未分化白细胞的CD3和CD22定位在细胞质中，因此除了对细胞表面分子的染色，细胞内生物分子的免疫染色是必不可少的。

为了使细胞内生物分子的免疫染色达到更好的效果，Nordic-MUbio推出了一款适用于流式细胞固定和通透的试剂盒 FIX&PERM®，该试剂盒可以同时对细胞表面和细胞内的生物标志物进行免疫染色，将整个流式细胞免疫染色时间缩短到1h以内，为细胞内生物分子的鉴定提供了一种更好、更高效的选择。有研究者使用FIX&PERM®试剂盒，对多种细胞表面CD分子和细胞内Ki-67（一种细胞内的增殖标志物）进行双重染色，通过流式分析增殖细胞（Ki-67阳性）数量，来证明疾病状态之间存在着显著差异。

FIX&PERM®试剂盒由A液和B液两个试剂构成，其中A液能够温和地固定细胞，B液则起到通透细胞膜的作用。FIX&PERM®试剂盒的独特配方能有效地降低背景，把通透液和抗体一起加入细胞，还能让抗体更高效地穿过细胞膜，与细胞内生物分子结合（如细胞质或核酶、癌蛋白、细胞因子、免疫球蛋白等）。

FIX&PERM® Cell Fixation and Permeabilization Kit

货号: GAS-002

规格：8 x 5ml

应用：Flow Cytometry

FIX&PERM®优势特点：

固定细胞更加温和，保持细胞在流式细胞仪中的分散性；
可同时对细胞内和细胞表面的生物分子进行双重染色；
用时更短——-整个处理过程可在1h内完成，处理后的细胞可以立即检测，也可以暂时保存后检测（不超过24h）；
质控更严格——每个批次产品都要用已标定的血液样本检测，通过比较获得的白细胞分散性特征来确保不同批次试剂盒的一致性和稳定性。
FIX&PERM®试剂盒还可搭配Nordic-MUbio的细胞内生物标志物抗体，使流式检测效果更佳。

FIX&PERM®使用方法

取50µl待测样品（如全血、骨髓或单核细胞悬液）于5ml离心管中；
加入100 µl A液（固定液），室温孵育15min；
加入5ml PBS，300g离心5min；
移除上清，加入100µl B液（通透液）和20µl流式抗体，低速涡旋1-2s；
室温孵育15min；
参照第3步，用PBS再洗一遍细胞；
移除上清，用鞘液重悬细胞后做流式分析；如不能立即检测，可用0.5ml 1.0%甲醛重悬细胞，2-8℃避光保存，并在24h内检测。

Nordi-MUbio热销单克隆流式抗体

Nordic-MUbio还提供了一些列小鼠抗人PE/FITC耦连单克隆流式抗体，与FIX&PERM®试剂盒配合使用效果更佳。

抗原	克隆	IgG类型	抗体偶联物	规格	货号
CD3	UCHT1	IgG1	Purified	0.2 mg	GM-4011
			FITC-labeled	100 tests	GM-4012
			PE-labeled	100 tests	GM-4013
CD22	RFB4	IgG1	Purified	0.2 mg	GM-4051
			FITC-labeled	100 tests	GM-4052
			PE-labeled	100 tests	GM-4053
Lactoferrin	4C5	IgG1	Purified	0.2 mg	GM-4111
Lactoferrin	4C5	IgG1	PE-labeled	100 tests	GM-4113
Myeloperoxidase	8E6	IgG1	Purified	0.2 mg	GM-4191
(MPO-C2)			FITC-labeled	100 tests	GM-4192
(MPO-C2)			PE-labeled	100 tests	GM-4193
Lysozyme	LZ-2	IgG1	Purified	0.2 mg	GM-4131
Lysozyme	LZ-2	IgG1	FITC-labeled	100 tests	GM-4132
CD68	Ki-M7	IgG1	FITC-labeled	100 tests	GM-4152
IL-1 beta	FIB3	IgG1	FITC-labeled	100 tests	GM-4162
IFN-gamma	GZ4	IgG1	FITC-labeled	100 tests	GM-4172
Negative control	Vl-AP	IgG1	FITC-labeled	50 tests	GIC-201
Negative control	Vl-AP	IgG1	PE-labeled	50 tests	-
Lysozyme	LZ-2	IgG1	FITC-labeled	50 tests	GIC-206
Lactoferrin	4C5	IgG1	PE-labeled	50 tests	-
Myeloperoxidase	8E6	IgG1	FITC-labeled	50 tests	GIC-212
Lactoferrin	4C5	IgG1	PE-labeled	50 tests	-
Myeloperoxidase	8E6	IgG1	FITC-labeled	50 tests	GIC-213
CD3	UCHT1	IgG1	PE-labeled	50 tests	-
Myeloperoxidase	8E6	IgG1	FITC-labeled	50 tests	GIC-214
CD22	RFB4	IgG1	PE-labeled	50 tests

图1 Flow cytrometric analysis of normal bone marrow (BM) after fixation and pemeabilization using GAS-002, followed by immunostaining for lactoferrin and MPO-C2.

图2 Immunostaining with Nordic-MUbio CD22-PE conjugate of undifferentiated leukemia cells of B-ALL type.

图3 Immunostaining with Nordic-MUbio CD3-PE conjugate of surface CD3-negative undifferentiated leukemia cells of T-ALL type.

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参考文献：

Nies KPH, Kraaijvanger R, Lindelauf KHK, Drent RJMR, Rutten RMJ, Ramaekers FCS, Leers MPG. Determination of the proliferative fractions in differentiating hematopoietic cell lineages of normal bone marrow. Cytometry A. (2018) 93, 1097-1105 . doi: 10.1002/cyto.a.23564.