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新品上市 | RevIT™ AAV Enhancer, 提高AAV产量的又一利器!

腺相关病毒 (AAV) 是基因治疗中使用最广泛的传递机制近年来,基于AAV病毒开发的基因疗法的研发及临床试验注册项目数量呈指数级增长至目前,美国FDA已批准五项AAV疗法,同时,用于基因治疗的AAV是全球市场上最昂贵的药物之一,其中售价最高的Hemgenix®,每剂价格约为350万美元。由于该疗法每剂量可能需要1011-1016载量的AAV病毒,如何实现高效的AAV生产,已成为工艺流程优化中的重要一环。

必发888登录入口代理的Mirus成立于1996年,在核酸递送领域深耕多年,TransIT-VirusGEN® GMP 转染试剂支持AAV及慢病毒(LV)从科研到GMP商业级别生产。不同于传统基于单组分的转染试剂(如阳离子聚合物聚乙烯亚胺,PEI),Mirus将专利多聚物及脂质技术进行多重组合,针对不同细胞类型,不同应用场景,有着不同转染方案。

Mirus专利递转平台Polymers + Lipids的多重、多功能组合


     在病毒生产工艺方面,除了需要
克服细胞递转过程中的多重阻碍,以实现更高效转染和更低细胞毒性;增强子的加入,大幅度提升多种血清型AAV病毒生产载量。但Mirus并没有止步于此,为了进一步提高下游生产中的AAV产量, 今年七月底必发888登录入口代理的Mirus发布用于AAV生产的RevIT™ AAV Enhancer,可搭配Mirus TransIT-VirusGEN® GMP 转染试剂或其他品牌转染试剂 (PEI)。基于HEK293悬浮细胞数据,相对于老版本AAV增强RevIT™ AAV EnhancerAAV基因组滴度提高1.2-4.9,并且使用更便捷,非常容易整合现有AAV生产工艺流程中。Mirus RevIT™ AAV Enhancer的推出,使得AAV上游生产成本进一步降低成为可能,进而降低基因治疗药物单剂量成本。

 

RevIT™ AAV Enhancer

 

 

RevIT™ AAV Enhancer:可以将AAV基因组滴度提升1.2-4.9倍


实验结果显示,平行对比Mirus TransIT-VirusGEN®搭配老版本AAV增强子(VirusGen + Enh 1.0)新版本RevIT™ AAV Enhancer (VirusGen + RevIT),针对AAV2、AAV8、AAV9不同血清型,基因组滴度分别有着1.6、4.9以及1.2倍提升除此之外,在测试的所有血清型中,使用RevIT™ AAV Enhancer也在不同程度上收获了更高比例的实心率 (图1)该结果表明在搭配Mirus TransIT-VirusGEN®转染试剂时,新版本增强剂RevIT™ AAV Enhancer可显著提高AAV基因组滴度(GC/mL)实心率(%Full Capsids)。

RevIT Transfection VirusGEN

图1 . 相比Mirus老版本增强子,加入RevIT™ AAV Enhancer后,可将AAV基因组拷贝数提升1.2-4.9,同时改善AAV病毒实心率。

 

RevIT™ AAV Enhancer具有广泛适配性,搭配其他品牌转染试剂PEI,AAV病毒基因组滴度有着显著提升

平行测试两个品牌转染试剂:Polyplus FectoVIR®转染试剂(“Polymer F)以及Polyplus PEIpro®转染试剂(“Polymer P),在加入Mirus RevIT™ AAV Enhancer,针对不同血清型AAV2、AAV8、AAV9,AAV基因组滴度分别有着1.7-2.0x、1.7-2.2x、2.2-2.3x提升(图2)实验结果表明,在搭配其他品牌病毒转染试剂时,Mirus RevIT™ AAV Enhancer可显著提高AAV病毒基因组滴度(GC/mL)。

RevIT AAV transfection enhancer improves titer across serotypes

图2. “Polymer F”以及“Polymer P”病毒转染试剂搭配Mirus RevIT™ AAV Enhancer,针对不同血清型AAV,其病毒基因组滴度都有着显著提升。

RevIT™ AAV Enhancer具有广泛的适配性,可适用于不同培养基体系

Mirus TransIT-VirusGEN®转染试剂搭配RevIT™ AAV Enhancer,在不同品牌的病毒生产培养基中,具有很好的兼容性测试使用293-VP 2.0细胞,搭配培养基类型包括VPM (Thermo Fisher) BalanCD HEK 293 (Irvine Scientific)。实验结果表明,针对不同血清型AAV2、AAV5、AAV8、AAV9,RevIT™ AAV Enhancer在不同培养基实验条件下AAV病毒基因组滴度提升方面并无显著差异(图3

A graph of different sizes and colors Description automatically generated

图3. 更换不同品牌病毒生产培养基,AAV病毒基因组滴度的增加无显著差异。


Rev
IT™ AAV Enhancer实验流程更灵活在转染的不同时间窗口加入有着近似表现

为了进一步确认加入RevIT™ AAV Enhancer提高AAV产量是否需要严格把控加入时间,平行测试不同加入时间点,包括转染前30min或60min、转染时及转染后。实验结果显示,于对照在不同时间点加入RevIT™ AAV Enhancer AAV8病毒基因组滴度稳步的提升(2倍),并且病毒实心率也稳定保持在相同水平(图4)。该实验结果表明,RevIT™ AAV Enhancer加入时间点的灵活性,一定程度上简化了生产工作流。






A graph of different sizes and colors Description automatically generated

图4.  RevIT™ AAV Enhancer在转染的不同时间窗口加入有着近似表现

 

实验tips如何进行病毒转染试剂评估?什么是病毒载量?如何检测?

  更多详细信息,请查看Technical Resources中Virus Titer Reference Card ,更加详细地介绍了检测和计算病毒滴度的详细方法。

A diagram of a scientific experiment Description automatically generated with medium confidence

相关产品信息及链接

产品名称

规格

货号

链接

RevIT™ AAV Enhancer

1.5 ml

MIR 8000

link

10 x 1.5 ml

MIR 8006

VirusGEN® AAV转染试剂及RevIT™ AAV Enhancer

For 1L of Culture

MIR 8007

For 10L of Culture

MIR 8008

TransIT-VirusGEN®转染试剂

0.3 ml

MIR 6703

link

0.75 ml

MIR 6704

1.5 ml

MIR 6700

5 x 1.5 ml

MIR 6705

10 x 1.5 ml

MIR 6706

30 ml

MIR 6720

TransIT-VirusGEN® GMP级别转染试剂

150 ml

MIR 6845-GMP

link

VirusGEN® AAV转染试剂(套装)

1 kit for 1 L of cell culture

MIR 6750

link

VirusGEN® GMP级别AAV转染试剂(套装)

1 Kit - for 50 L of cell culture

MIR 6815-GMP

link

VirusGEN® LV转染试剂(套装)

1 kit for 1 L of cell culture

MIR 6760

link

VirusGEN® GMP级别LV转染试剂(套装)

1 Kit - for 50 L of cell culture

MIR 6825-GMP

link

 
 如何查找或选择适合转染试剂

请登录Mirus官网线上工具Reagent Agent®,支持超过1000种细胞类型、多种核酸类型转染试剂查询。

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Mirus产品年鉴

   必发888登录入口代理的美国Mirus公司成立于1995年,是世界上很早开发高效、低毒转染试剂的公司,同时也是该类试剂的主要供应商之一。其产品线涵盖化学转染试剂、电转染产品、病毒生产和转导产品,适用于基因功能研究、蛋白生产、病毒载体生产和动物模型构建等领域。Mirus被公认为转染试剂开发的领跑者,其许多杰出成果获得世界公认与广大用户的好评。

 

   bifa必发唯一官网主页是Mirus中国区代理,始终秉承着专业、严谨的态度为客户提供优质的产品与服务Mirus热销转染产品常备现货。如果您对上述产品感兴趣,欢迎致电北京必发888登录入口客服热线400-050-4006或登录网站www.xmjsci.com了解更多产品信息。

 

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