蛋白类药物如单克隆抗体和抗体偶联药物因具有极佳的治疗效果与靶向作用正以火箭般的速度飞速发展，但这些药物为患者带来健康的同时，也为药品研发人员带来更大的压力。因其在诸多环境暴露下的不稳定性，需要制药科学家们对药物质量进行持续监控，以满足生产和临床需要。蛋白质在制备，生产和运输存储过程中可能面对着如冻融，高温和震荡的多重压力，随之而来的是对蛋白聚集体增多的担忧。蛋白聚集会影响药物安全，严重的蛋白聚集还可能增加对患者的免疫源性风险。令人欣慰的是，分子排阻色谱法作为监控蛋白类药物聚集体的有效检测手段已经成为一项金标准。我们使用ZF-LC-0001分子排阻色谱（SEC-HPLC）通用流动相对单克隆抗体与抗体偶联药物进行分析,获得了令人非常满意的效果。

目前SEC-HPLC方法已经标准化，研究人员可以根据蛋白分子量选择标准的商业化色谱柱进行定量分析，但流动相的选择通常依赖经验。这些流动相一般为含盐的水溶液，调配到一定的pH值后再进行分析。然而含盐流动相在SEC-HPLC分析过程中会面临容易长菌的问题，虽然在流动相中加入0.5-1M氯化钠会产生一定的抑菌效果，但效果有限且可能带来盐析堵塞仪器的风险。部分研究人员还会选择在流动相中加入少许叠氮化钠来抑制细菌生长，但随着化学品监管逐渐严格，这项手段也成为不可能。在蛋白药物研发阶段，如预制剂处方开发阶段，往往需要进行多处方筛选设计与全面的应力实验，这些应力实验包括高温、冻融、光照与振荡，实验的全面设计会带来分析量的增加，如一次头碰头SEC-HPLC分析会大于200个样本（N=3），这使得液相分析的时间大于4天。通常，一个序列的分析中间不可以中断，若意外中断会带来新的校准和系统平衡，且中断前的数据仍需要进行质量保证评估才可以使用。为了解决这一问题，舟帆生物新推出了一款SEC-HPLC通用流动相（货号：ZF-LC-0001），可以满足样品的持续分析，常规条件下十天之内不会影响分析。

1. SEC流动相抑菌效力对比

按照常规配方进行配比制备本次实验所用不含舟帆生物特有配方流动相。分别将对照组与 ZF-LC-0001流动相（1×）罐装至干净透透明的1L流动相瓶中，分别于0, 1, 2, 5, 10天时拍照留样，记录图片如图1所示。与对照组流动相相比，ZF-LC-0001流动相显示出优异的抗菌效力。结果显示对照组流动相于第1天即出现肉眼可见异物，并于第2天现象加重，第5天取样与第10天取样拍照后发现两者状态相似。ZF-LC-0001流动相直至第10天仍然保持清澈透明。此留样阶段的流动相被用于后面实验的分析。

图1. 常规流动相与舟帆生物 ZF-LC-0001 流动相抑菌效力对比

2. 日内精密度与日间精密度分析

使用ZF-LC-0001在常规分析环境下放置10天后的流动相，对重组抗人ER2抗体因子单克隆

抗体样品进行日内精密度与日间精密的分析见图2。数据表明流动相在放置10天后仍然有非常好的日内精密度与日间精密度：[保留时间（Time）与总峰面积(mAU)分别为图A, C]，以区分序列间日内的精密度。后3份于第2日进样一个轮次，与第1日第二轮次进样进行日间精密度的对比（保留时间与总峰面积分别为图B, D）。

图2. 舟帆生物ZF-LC-0001流动相日内精密度和日间精密度

3. 数据准确性高

使用ZF-LC-0001分析重组抗人ER2抗体因子单克隆抗体8个进样量梯度的过程，R2=0.9999，数据表明，在仪器最大分析限度内，进样梯度的变化对数据的准确性影响较小。

图3. 舟帆生物ZF-LC-0001流动相线性及进样量与总峰面积数据

4. 广泛的样品兼容性

使用ZF-LC-0001分析了5个单克隆抗体与2个抗体偶联药物的分子排阻色谱，我们将7个蛋白药物全部使用纯水稀释至1mg/mL，统一进样，结果如图4所示，表明了ZF-LC-0001流动相无论在一般的单克隆抗体药物或是疏水性较强的抗体偶联药物中均可以达到普适性分析的效果，并且对于低浓度进样，蛋白聚集体与单体仍然显示出极好的分离度和分辨率。

图4. 5种单克隆抗体与2种抗体偶联药物在低浓度下进样的SEC色谱图

5. 改善分析图谱

除此之外，与常规流动相比，使用ZF-LC-0001能获得更加完美的峰形，如图5所示，峰宽更窄，拖尾得到改善，这样可有效避免为减少拖尾向流动相中加入有机溶剂，从而进一步避免溶液盐析堵塞分析系统，造成序列意外终止的风险。

图5. 使用ZF-LC-0001与常规高盐流动相的SEC色谱图对比（样品分别为2种mAb与2种ADC药物）

综上所述，舟帆生物新推出的SEC-HPLC通用流动相（货号：ZF-LC-0001）具有以下突出优势：

• 卓越的抗菌能力，有效保护贵重仪器与高价值耗材不会在分析过程中受损；
• 优异的稳定性，在分析条件下放置10天后仍能达到令人满意的日内和日间稳定性与可观的线性数据；
• 广泛的样品兼容性，适用于分析单抗、ADC、重组蛋白与多肽（此部分数据未展示）等多种蛋白类药物；
• 改善图谱峰型，优化拖尾问题；
• 使用方便，对人体无毒害且环境友好。

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杭州舟帆生物科技有限公司成立于2018年，拥有一支高效的研发团队，是一家专注于生物科技领域的公司。公司在蛋白质药品工艺开发和优化、分子诊断等领域拥有丰富的经验和技术优势。我们的产品包括商业化毛细管凝胶电泳检测试剂盒、高效液相色谱离子交换检测试剂盒、细胞培养试剂、分子诊断试剂等。这些产品广泛应用于生命科学研究、药物开发等领域，与众多知名研究机构和企业建立了紧密的合作关系，共同推动生物科技的发展和应用。

参考文献：

Liu JZ, Li L, Fang WJ*. A novel size exclusion chromatography method for the analysis of monoclonal antibodies and antibody-drug conjugates by using sodium iodide in the mobile phase. Pharm Res, 2024, in press.