前言
离子交换色谱法是一种重要的生物化学分离技术,它基于带电分子与固定相之间的相互作用,广泛应用于蛋白质分析,使得通过酸碱变体推导蛋白相关降解途径成为可能,并为相关的质量控制和分子优化提供指导数据。而在蛋白质分析过程中,离子交换色谱法方法开发是非常困难的,这受困于每个蛋白的空间结构和氨基酸排列截然不同,这种跳跃式的变化使得每种蛋白拥有不同的等电点与唾液酸或糖基化程度,这大大增加相关方法开发的困难程度,此开发的关键步骤包括多步:选择合适的离子交换介质、优化缓冲体系、确定洗脱条件、调整流速和柱温等。这些步骤确保了离子交换色谱法在蛋白质分析中的有效性和可靠性,但繁琐的方法开发步骤也为试验带来极大的时间成本,间接的增加投入成本,且伴随着方法开发失败的风险,这成为蛋白药物分析领域迫在眉睫的问题。舟帆生物已经开发出关于离子交换色谱法的通用流动相,并取得了令人鼓舞的进展。
由于样品中各组分的电荷性质、大小、形状和疏水性等都会影响离子交换色谱的过程和结果,选择合适的离子交换介质和缓冲体系尤为重要。离子强度、pH值、温度和流速等色谱条件的优化需要通过实验来确定,并且离子交换色谱法中离子强度和pH值的微小变化都可能导致分离效果的显著差异。在日常配制关于离子交换色谱法流动相时精确控制这些参数是实现稳定和重复性分离的关键。然而,在实际操作中,由于缓冲液的制备和使用过程可能会引入误差,通常导致色谱峰保留时间的迁移等问题。为了解决上述问题,舟帆生物自主开发并优化出了一款用于离子交换色谱法的通用流动相,该产品综合考虑了分析成本和时间效率,在离子色谱方法开发过程中兼具了分离效率、分析时间和成本,提供了一种高效、经济且通用的离子交换色谱流动相的选择。
材料与方法
仪器、色谱柱
安捷伦1260 高效液相色谱系统
ThermoProPac™ WCX-10 HPLC 10μm 4×250mm色谱柱
样品
实验中用到的样品包括8个蛋白药物样品均来自合作方浙江大学药学院生物药制剂与分析团队。
IEC-HPLC参数
下表列出了使用ZF-LC-0002流动相A&B(10×)进行IEC-HPLC液相分析的色谱参数:
实验参数
将8种蛋白稀释到1mg/mL,并使用CpB酶酶切,酶切后的样品10000 rmp/min离心十分钟取上清液进样检测。
结果
见图1。
图1. 8 种蛋白药物的IEC-HPLC 色谱图
结论
开发出一种离子交换色谱法通用的流动相,在8种蛋白药物样品的分析中使用简单的洗脱条件即可对蛋白分子的酸性变体和碱性变体达到较好的分离,为离子交换色谱法相关的方法开发提供了一项优异选项,可以为企业和相关研究单位大大缩短方法开发时间和投入。
产品订购信息
货号 |
品名 |
规格 |
ZF-LC-0002 |
IEC-HPLC通用流动相(10×) |
盒(含A液、B液各1000mL) |
试用申请
IEC-HPLC通用流动相试用装火热申请中,如您对上述产品感兴趣,请关注“必发888登录入口微信公众号”,发送关键词“IEC”,填写问卷即可获得免费试用机会,数量有限,先到先得!
品牌介绍
bifa必发唯一官网主页是舟帆生物总代理,始终秉承着专业、严谨的态度为客户提供优质的产品与服务。如果您对上述产品感兴趣,欢迎致电北京必发888登录入口客服热线400-050-4006或登录网站www.xmjsci.com了解更多产品信息。